Bakteri Gram Positif dan Negatif

Bakteri dapat diklasifikasikan berdasarkan metoda pewarnaan gram menjadi 2 kelompok besar, yaitu bakteri gram positif dan bakteri gram negatif. Pewarnaan ini  membedakan bakteri berdasarkan karakteristik fisik dan kimia dinding sel-nya. Pewarnaan Gram meliputi 3 proses utama, yaitu pengecatan dengan kristal violet, dekolorisasi (penghapusan warna)dengan etil alkohol atau aseton, kemudian counterstaining atau pemberian pewarna kontras menggunaan air fukhsin.

 bakteri gram positif

 bakteri gram negatif

Pada awal pengecatan, semua bakteri akan berwarna ungu, proses dekolorisasi dan pemberian warna kontraslah yang membedakan antara kedua jenis bakteri ini. Bakteri gram positif akan menunjukkan warna ungu karena memiliki lapisan peptidoglikan tebal yang menahan kristal violet selama pengecatan gram.Sedangkan pada bakteri gram negatif akan berwarna merah akibat tipisnya dinding peptidoglikan sehingga kristal violet terbuang selama proses dekolorisasi dan pemberian air fukhsin akan mengecat bakteri gram negatif menjadi merah.

Pewarnaan Gram

• Reagen
• Kristal violet (pewarnaan primer)
• Larutan lugol  (untuk memfiksasi kristal violet di dinding sel)
• Etil alcohol,aseton, alcohol 96% (untuk dekolorisasi)
• Air fukhsin atau Safranin (pewarnaan kontras)
• Air
• Langkah kerja
• Suspensi kuman ( biakan kuman dalam tetesan garam fisiologis) disebarkan setipis mungkin dan melingkar diatas glass deck.
• Biarkan mengering atau dapat dihangatkan di atas api.
• Fiksasi suspensi dengan dilewatkan diatas api 3 kali.
• Warnai kuman dengan kristal violet selama 5 menit.
• Bersihkan kristal violet yang tidak terikat dengan bilasan air yang lembut (jangan melebihi 5 detik).
• Beri larutan lugol, biarkan selama 1 menit untuk memfiksasi kristal violet).
• Buang larutan lugol, bilas dengan etil  alcohol atau alkohol 96% secara lembut hingga tidak ada zat warna yang mengalir lagi.Pada tahap ini bakteri gram negative akan tampak tidak berwarna ungu lagi.Sedangkan bakteri gram positif tetap berwarna ungu.
• Bilas sampel dengan air, dan beri pewarnaan kontras dengan air fukhsin selama 1-2 menit. Bakteri gram positif tetap berwarna ungu dan bakteri gram negative akan menjadi merah akibat pewarnaan kontras.
• Cuci sampel dan periksa dengan mikroskop.

Karakteristik bakteri gram positif :

• Memiliki cytoplasmic lipid membrane
• Memiliki lapisan peptidoglikan yang tebal
• Terdapat asam teichoic dan lipoid yang membentuk lapisan asam lipoteichoic yang berguna untuk chelating agen dan untuk adhesi tipe tertentu.
• Beberapa spesies memiliki kapsul polisakarida
• Beberapa spesies memiliki flagellum
• Jika terdapat akan diperkuat oleh 2 cincin, berbeda dengan bakteri gram negative yang flagellumnya diperkuat oleh 4 cincin.

Karakteristik bakteri gram negative :

• Memiliki Cytoplasmic membrane
• Lapisan peptidoglikan tipis
• Memiliki membran tambahan diluar lapisan peptidoglikan yang dipisahakan oleh spasium periplasmik.
• Membran luar terdiri atas Lipopolisakarida (LPS) yang tersusun oleh lipid A, inti polisakarida, antigen O
• Terdapat porin di membran luar sebagai pori-pori untuk molekul tertentu.
• Memiliki S-layer (Surface layer) yang melekat langsung pada membran luar.
• Jika memiliki flagella, maka akan disokong oleh 4 buah cincin.
• Tidak memiliki asam teichoic ataupun asam lipoteichoic.
• Lipoprotein merekat pada polisakarida.
• Kebanyakan tidak mengalami sporulasi.

Beberapa perbedaan sifat yang dapat dijumpai antara bakteri gram positif dan bakteri gram negative adalah sebagai berikut :

Pembeda	Bakteri gram positif	Bakteri gram negatif
Dinding sel :       Lapisan peptidoglikan       Kadar lipid	lebih tebal 1-4 %	lebih tipis 11-22%
Resistensi terhadap alkali (1% KOH)	tidak larut	larut
Kepekaan terhadap Iodium	lebih peka	kurang peka
Toksin yang dibentuk	eksotoksin	endotoksin
Resistensi terhadap tellurit	lebih tahan	lebih peka
Sifat tahan asam	ada yang tahan asam	tidak ada yang tahan asam
kepekaan terhadap penisilin	lebih peka	kurang peka
kepekaan terhadap streptomisin	tidak peka	peka

                                                                                               

Bakteri gram positif memiliki lapisan petidoglikan yang tebal tetapi tidak memiliki membranluar. Sedangkan pada bakteri gram negative, lapisan peptidoglikan tipis dan memilki membran luar yang tersusun atas Lipopolisakarisa (LPS) dan protein.

Bakteri Gram Positif

Berdasarkan klasifikasi phyla bakteri yang asli, bakteri gram positif termasuk dalam filum Firmicutes. Didalamnya terdapat kelompok- kelompok bakteri yang sudah banyak dikenal, yaitu :

·         Staphylococcus

·         Streptococcus

·         Enterococcus

·         Bacillus

·         Corynebacterium

·         Nocardia

·         Clostridium

·         Actinobacteria

·         Listeria

 Bakteri Gram Negatif

Bakteri gram negatif termasuk dalam divisi Gracillicutes. Proteobacteria  adalah grup mayor dalam kelompok bakteri gram negatif.Jenis-jenisnya yaitu :

·         Enterobacteriaceae

o        Escherichia Coli

o        Salmonella

o        Sigella

·         Pseudomonas

·         Moraxella

·         Helicobacter

·         Stenotrophomonas

·         Bdellovibrio

·         Bakteri asam asetat

·         Legionella

·         Alpha-proteobacteria

o        Wolbachia

·         Cyanobacteria

·         Spirochaeta

·         green sulfur & green non-sulfur bacteria.